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活體成像熒光素酶-底物系統(tǒng)原理PerkinElemer/Revvity品牌

更新時(shí)間:2026-01-16   點(diǎn)擊次數(shù):285次

想實(shí)時(shí)掌控裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中腫瘤生長情況?想知道自己打進(jìn)小鼠體內(nèi)的細(xì)胞定植位置?想知道藥物處理對體內(nèi)腫瘤的影響?這些都可以通過活體成像熒光素酶-底物系統(tǒng)原理PerkinElemer/Revvity品牌來實(shí)現(xiàn),讓你隨時(shí)掌控細(xì)胞位置和數(shù)量。讓細(xì)胞或者小動(dòng)物體內(nèi)目的部位表達(dá)追蹤器:熒光素酶。

熒光素(Luciferin)是一種在各種生物發(fā)光生物的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)物質(zhì)。當(dāng)熒光素(Lucferin)在熒光素酶(Luciferase)和 ATP 的催化作用下被氧化時(shí),就會(huì)產(chǎn)生光。由于反應(yīng)依賴于 ATP,它使研究人員能夠確定能量或生命的存在。熒光酶(Luciferase)是生物體內(nèi)催化英光素(ludfen)或者脂肪醛氧化發(fā)光的一類酶的總稱,熒光毒酶可以從細(xì)菌,黃火蟲,海星等提取出來。螢火蟲熒光素(fireflyluciferase)由于發(fā)射光譜的特性,其是一種特別好的體外成像報(bào)告系統(tǒng)熒光素酶是一類能催化底物產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,不同來源的熒光素酶各有特點(diǎn),可催化底物發(fā)出不同顏色的光。其中螢火蟲熒光素酶(Luciferase)靈敏度高,檢測線性范圍寬達(dá)7~8個(gè)數(shù)量級,成為常用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞報(bào)告基因。將熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi),加入其底物熒光素孵育細(xì)胞,在ATP、O2和鎂離子存在情況下,熒光素酶氧化熒光素底物便可產(chǎn)生可見光反應(yīng)。實(shí)現(xiàn)“目的部位發(fā)光,實(shí)時(shí)成像追蹤"。


活體成像熒光素酶-底物系統(tǒng)原理PerkinElemer/Revvity品牌

圖2:熒光素酶和熒光素鉀鹽(貨號(hào):122799)反應(yīng)發(fā)光原理

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成像特點(diǎn)

◎ 無輻照,對生物體幾乎無害。

◎ 生物發(fā)光,無需激發(fā)光源。

◎ 靈敏度高,幾百個(gè)細(xì)胞就能檢測。

◎ 穿透性好,3-4cm組織深度仍能檢測。

◎ 信噪比高,熒光信號(hào)強(qiáng),抗干擾性好。



應(yīng)用方向

腫瘤生長:裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中實(shí)時(shí)無侵入觀察腫瘤生長情況,無需剝瘤測量。

腫瘤藥物:檢測給藥對于腫瘤生長或是轉(zhuǎn)移的影響,熒光素底物3小時(shí)即可排除,對藥物實(shí)驗(yàn)無干擾。

細(xì)胞定位:檢測外源細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的定位分布。

基因表達(dá)調(diào)控:目的基因或目的基因啟動(dòng)子和熒光素酶基因融合,檢測藥物處理或是病程發(fā)展中基因表達(dá)的變化。

干細(xì)胞研究:監(jiān)測干細(xì)胞的移植、存活和增殖;示蹤干細(xì)胞在體內(nèi)的分布、遷移。


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常見問題

Q1:與傳統(tǒng)技術(shù)相比,生物發(fā)光成像技術(shù)優(yōu)勢體現(xiàn)在哪些方面?

與傳統(tǒng)技術(shù)相比,該技術(shù)對于腫瘤轉(zhuǎn)移的研究、基因治療、流行病學(xué)的發(fā)病學(xué)研究,干細(xì)胞示蹤,白血病的相關(guān)研究等方面,比傳統(tǒng)方法更靈敏,還可以通過一系列轉(zhuǎn)基因動(dòng)物疾病模型,來快速直觀的進(jìn)行相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)理和藥物篩選研究。

Q2:如何用熒光素酶基因標(biāo)記干細(xì)胞?

可標(biāo)記組成性表達(dá)的基因,做成轉(zhuǎn)基因小鼠,干細(xì)胞就被標(biāo)記了,從該小鼠的骨髓取出造血干細(xì)胞,移植到另外一只小鼠的骨髓內(nèi),可以用該技術(shù)示蹤造血干細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化及遷徙到全身的過程。另外一種方法是用慢病毒標(biāo)記干細(xì)胞。

Q3:在注射熒光素后多久進(jìn)行檢測比較合適,發(fā)光能持續(xù)多久?

腹腔注射一般10-15min后熒光信號(hào)達(dá)到穩(wěn)定期,20-30min后開始衰減,3h后熒光素排除,發(fā)光消失。

Q4:怎么將熒光素注入小鼠體內(nèi),注射方法之間的區(qū)別是什么?

熒光素可通過腹腔注射或尾部靜脈注射注入小鼠體內(nèi)。約1 min可擴(kuò)散到小鼠全身。大部分情況下使用熒光素濃度為150 mg/kg。對于20 g的小鼠約使用3 mg的熒光素即可。對于腹腔注射來講,擴(kuò)散較慢,開始發(fā)光較慢,持續(xù)發(fā)光時(shí)間較長。對于熒光素的尾部靜脈注射,擴(kuò)散快,開始發(fā)光快,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間較短。


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