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小鼠骨髓源巨噬細(xì)胞(BMDM)培養(yǎng)基配方及原理

更新時間:2026-04-21   點(diǎn)擊次數(shù):779次

骨髓源巨噬細(xì)胞(BMDM)培養(yǎng)基配方:含伊斯科改良杜氏培養(yǎng)基(IMDM),添加 10% 胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 鏈霉素、10 mM 巰基甘油。


巰基甘油(Thioglycerol)作用

1. 核心本質(zhì)

還原性抗氧化劑、巰基供體,和 β- 巰基乙醇(β-ME)功能高度相似,很多巨噬細(xì)胞專用 IMDM 培養(yǎng)基配方統(tǒng)一用它替代。


2. 在 BMDM 培養(yǎng)里 4 大關(guān)鍵功能

(1)清除活性氧 ROS,抗氧化保護(hù)細(xì)胞

骨髓原代細(xì)胞、單核細(xì)胞分化巨噬細(xì)胞過程中本身極易氧化應(yīng)激死亡。巰基甘油自帶游離巰基(-SH),直接清除培養(yǎng)體系內(nèi) ROS,降低氧化損傷,大幅提高原代骨髓細(xì)胞存活率。

(2)維持細(xì)胞內(nèi)還原環(huán)境,穩(wěn)定蛋白與酶活性

細(xì)胞內(nèi)多種代謝酶、分化相關(guān)信號蛋白需要還原態(tài)環(huán)境才能正常工作;尤其單核→巨噬細(xì)胞分化依賴的氧化還原穩(wěn)態(tài),缺了分化效率會暴跌。

(3)促進(jìn)骨髓單核細(xì)胞存活、提升 BMDM 誘導(dǎo)分化率

M-CSF 誘導(dǎo)分化 BMDM 時,骨髓單核細(xì)胞體外很容易凋亡;還原性添加劑可以抗凋亡、延長細(xì)胞存活時間,讓更多單核細(xì)胞成功分化為成熟巨噬細(xì)胞。

(4)穩(wěn)定血清與培養(yǎng)基營養(yǎng),延緩營養(yǎng)降解

胎牛血清(FBS)里的生長因子、脂質(zhì)、維生素長期培養(yǎng)易被氧化失活;

巰基甘油能保護(hù)血清成分,讓培養(yǎng)基營養(yǎng)更穩(wěn)定,適合5~7 天長時誘導(dǎo)分化 BMDM。


3. 和配方濃度對應(yīng):10 mM 是什么水平?

● 常規(guī)干細(xì)胞 / 免疫細(xì)胞:50 μM ~ 0.1 mM β- 巰基乙醇

BMDM 體系:10 mM 高濃度巰基甘油

屬于巨噬細(xì)胞專用強(qiáng)化還原配方,專門適配 IMDM 基底培養(yǎng)基,是經(jīng)典骨髓巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系標(biāo)配。


4. 不加巰基甘油會出現(xiàn)什么問題?

骨髓細(xì)胞死亡率升高,復(fù)蘇差、貼壁差

M-CSF 誘導(dǎo)分化不夠,成熟 BMDM 變少

細(xì)胞易自發(fā)應(yīng)激活化,基線炎癥偏高

后期極化(M1/M2)、吞噬、胞葬實驗本底紊亂

總之:

巰基甘油作為還原性抗氧化物質(zhì),清除細(xì)胞內(nèi)活性氧、維持氧化還原穩(wěn)態(tài),減輕骨髓單核細(xì)胞氧化應(yīng)激凋亡,保障 M-CSF 誘導(dǎo)下骨髓源巨噬細(xì)胞的存活與高效分化。






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