急性炎癥是一種保護(hù)性反應(yīng)，旨在殺滅入侵的病原體，通常是自限性的，并最終導(dǎo)向愈合。然而，免疫細(xì)胞的失控激活以及急性炎癥反應(yīng)無法自限，將導(dǎo)致慢性炎癥，進(jìn)而引起組織損傷。在組織損傷或感染后，單核細(xì)胞從循環(huán)中被募集，并分化為M1型巨噬細(xì)胞，后者通過釋放炎性細(xì)胞因子、活性氧、蛋白酶和抗菌肽來促進(jìn)炎癥反應(yīng)。隨后，巨噬細(xì)胞獲得強(qiáng)效的抗炎和促再生活性，廣義上稱為M2型巨噬細(xì)胞。除了拮抗M1型反應(yīng)外，M1向M2表型的轉(zhuǎn)換在促進(jìn)組織再生和恢復(fù)穩(wěn)態(tài)方面也至關(guān)重要。M1巨噬細(xì)胞主導(dǎo)的異常炎癥是多種慢性炎癥性疾病（包括動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥性腸病、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥和慢性靜脈性腿部潰瘍）的發(fā)病機(jī)制之一。因此，開發(fā)能夠減輕急性炎癥并促進(jìn)M2型極化的治療藥物具有重大意義。

巨噬細(xì)胞極化在損傷后骨骼肌再生過程中起著核心調(diào)控作用。衛(wèi)星細(xì)胞——肌肉中的成體干細(xì)胞——被激活后增殖、遷移至損傷部位、融合并分化，形成新的肌纖維。巨噬細(xì)胞直接調(diào)控衛(wèi)星細(xì)胞的活化和成熟，對(duì)肌肉再生至關(guān)重要。在人肌肉損傷后，M1型巨噬細(xì)胞在體外和體內(nèi)均可促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞及肌源性前體細(xì)胞的增殖，而M2型巨噬細(xì)胞則促進(jìn)其分化。巨噬細(xì)胞極化失衡，特別是向M1表型偏移，已被證實(shí)會(huì)抑制骨骼肌修復(fù)。向M2表型的轉(zhuǎn)化對(duì)于最終獲得功能性肌肉至關(guān)重要。

本研究的核心假說是：IL-4偶聯(lián)的金納米顆粒（AuNPs）能夠引導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2a型極化，從而增強(qiáng)缺血性損傷后功能性骨骼肌的再生能力。IL-4是一種抗炎細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞向M2a狀態(tài)極化。外源性IL-4足以通過自我更新驅(qū)動(dòng)M2型巨噬細(xì)胞的積累，這表明遞送IL-4可在無需進(jìn)一步招募具有破壞性的M1型巨噬細(xì)胞的情況下，誘導(dǎo)治療性M2型巨噬細(xì)胞的擴(kuò)增。IL-4已在多種炎癥性疾病模型（包括自身免疫性脫髓鞘疾病、關(guān)節(jié)炎和慢性皮膚炎癥）中被廣泛探索作為潛在治療藥物。然而，由于其在體內(nèi)半衰期短，其應(yīng)用需要反復(fù)輸注，由此產(chǎn)生的高劑量需求和系統(tǒng)性副作用限制了IL-4治療的應(yīng)用。在本研究中，我們利用納米顆粒（NPs） 進(jìn)行IL-4遞送，因?yàn)榕c一次性注射給藥相比，納米顆粒能夠在靶組織內(nèi)實(shí)現(xiàn)廣泛分布并延長(zhǎng)保留時(shí)間。我們特別選用金納米顆粒，是因?yàn)樗鼈兛梢栽谂R床相關(guān)尺寸范圍內(nèi)合成單分散粒徑，可注射使用，并且在人體中表現(xiàn)出極低的毒性或免疫原性。金的制劑已獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)用于治療關(guān)節(jié)炎——一種慢性炎癥性疾病。

小鼠造模：

選用雌性C57BL/6J小鼠（6–8周齡），通過左側(cè)單側(cè)股動(dòng)脈及股靜脈結(jié)扎術(shù)誘導(dǎo)后肢缺血模型。

氯膦酸鹽脂質(zhì)體ClodronateLiposomes清除骨骼肌肌肉巨噬細(xì)胞清除方案：

通過結(jié)扎股動(dòng)脈/靜脈，對(duì)C57BL6/J小鼠的左側(cè)脛骨前?。═A）施加缺血性損傷。為了耗竭單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，從手術(shù)前2天開始，對(duì)小鼠給予荷蘭Liposoma氯膦酸鹽（clodronate）或作為對(duì)照的PBS脂質(zhì)體（Liposoma）處理。

給藥時(shí)間線：

巨噬細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)方案
氯膦酸鹽脂質(zhì)體（Clodronate liposomes）及PBS脂質(zhì)體均購(gòu)自Liposoma公司。具體給藥方案如下：

● 靜脈注射（眼眶后注射）：于手術(shù)前2天給予70 μL脂質(zhì)體進(jìn)行眼眶后靜脈注射；此后，分別于術(shù)后第1天及第5天再次給予相同劑量（70 μL）的注射（具體流程見圖S1A）。

● 局部肌肉注射（脛骨前肌內(nèi)注射）：于手術(shù)前1天，向缺血側(cè)脛骨前?。═A）肌內(nèi)注射10 μL脂質(zhì)體；此后，分別于術(shù)后第2天及第7天再次進(jìn)行同樣劑量（10 μL）的局部注射。

論文信息：

論文題目：Functional muscle recovery with nanoparticle-directed M2 macrophage polarization in mice

期刊名稱：PNAS

時(shí)間期卷：115 (42) 10648-10653

DOI: 10.1073/pnas.1806908115

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)：CP-010-010

規(guī)格：10ml+10ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes&Control Liposomes

辦事處：靶點(diǎn)科技

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體清除肌肉巨噬細(xì)胞。荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑ClodronateLiposomes見刊于PNAS：通過納米顆粒引導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞極化實(shí)現(xiàn)小鼠功能性肌肉恢復(fù)。

Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除巨噬細(xì)胞的材料和方法：

In vivo macrophage depletion

Macrophage Depletion. Clodronate and PBS liposomes were purchased from Liposoma (SKU: LIP-01). Liposomes (70uL) were administered retro-orbitally 2 days before surgery, and again on days 1 and 5 after surgery (Fig. S1A); 10uL were also administered intramuscularly into the ischemic TA 1 day before surgery, and again on days 2 and 7 after surgery.

巨噬細(xì)胞清除材料和方法文獻(xiàn)截圖：